1 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以GE-200高效液相色譜(HPLC)儀測(cè)定飼料中磺胺喳唔琳的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中磺胺喳唔琳的測(cè)定，最小檢測(cè)濃度為5.0 mg/kg.

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤內(nèi)容)或修訂版均不適用本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3 原理

用甲醇水溶液提取飼料中的磺胺喳嗯琳，離心，過(guò)濾，在HPLC儀上分離測(cè)定。

4 試荊和溶液

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純?cè)噭凰疄檎麴s水，色譜用水符合GB/T 6682一級(jí)水的規(guī)定。

4. 1 磺胺唾嗯琳標(biāo)準(zhǔn)品:含磺胺唆唔琳(G14HUN402S) 95-0%-

4.2 甲醇:色譜純。

4.3 磷酸鹽溶液:取磷酸二氫鉀3.4 0g 和磷酸氫二鉀5.7 1g ，加水溶解并稀釋至10 00m L

4.4 磺胺喳唔琳標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取磺胺喳唔琳(4.1)50 mg,溶于甲醇并稀釋成。. 1 mg/ mL的儲(chǔ)備液，置4℃冰箱中避光保存。有效期1個(gè)月。臨用前，取此儲(chǔ)備液用水稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

4.5 提取液:甲醇100 mL+水50 mLo

5 儀器

5. 1實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。

5.2GE-200高效液相色譜儀(配GE-200紫外檢測(cè)器)。

5.3分析天平:感量為。.00 01 g 和。.001g o

5.4旋渦振蕩器。

5.5離心機(jī):4 000 r/mine

5.6針頭過(guò)濾器:備孔徑為0. 45 um微孔濾膜。

6 試樣的制備

按GB/T 14699.1規(guī)定方法采樣，選取有代表性的飼料樣品，至少500g ，四分法縮減至100g ，磨碎，通過(guò)。0.45 mm孔篩，混勻，裝人密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

7 分析步驟

7.1 提取

稱取5g試樣，精確至0.0 01g ，加人提取液(4.5 )50 m L，旋渦振蕩器混勻，超聲水浴中提取15min,中間取出搖動(dòng)1次，然后以4 000 r/min離心5 min,靜置，取上清液過(guò)0.45 pm濾膜，供液相色譜測(cè)定。

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

準(zhǔn)確吸取儲(chǔ)備液適量，用水或流動(dòng)相稀釋成濃度分別為。0.10,0.50,1.00,2.00,10.00ug/m L的磺胺咬唔琳標(biāo)準(zhǔn)溶液，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

7.3 測(cè)定

7.3. 1 色譜條件

色譜柱:C18柱，柱長(zhǎng)150m m，柱內(nèi)徑4.6m m,粒度5m，或VertexC18色譜柱，4.6*150，5um。

流動(dòng)相:磷酸鹽溶液75ml+甲醇25ml，用前過(guò)0.45u m濾膜，并超聲脫氣。

流速: 1 ml/min,

檢測(cè)波長(zhǎng):240nm.

進(jìn)樣量:10ul-20ul

7.3.2 定性與定f方法

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品色譜的保留時(shí)間定性，定量由標(biāo)準(zhǔn)曲線或單點(diǎn)校準(zhǔn)。

7.4 結(jié)果的計(jì)算和表述

試樣中磺胺峰PAR,琳的含量按式(1)計(jì)算:

X=m1/m*n (1)

式中:

X一試樣中磺胺唆嗯琳的含量，單位為毫克每千克(mg/kg) ;

M1一色譜峰面積對(duì)應(yīng)的磺胺喳唔琳的質(zhì)量，單位為微克(ug) ;

n— 稀釋倍數(shù);

m—試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點(diǎn)后1位

重復(fù)性

在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作人員使用同一臺(tái)儀器完成的兩個(gè)平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不大于10% 。