堿裂解法原理
堿裂解法的原理是：高PH 的溶液會使細胞壁粕類從而使得DNA和蛋白質變性。
將細菌懸浮液暴露于高pH值的強陰離子洗滌劑中，會使細胞壁破裂，染色體DNA和蛋白質變性，將質粒DNA釋放到上清中。
盡管堿性溶劑使堿基配對完全破壞，閉環(huán)的質粒DNA雙鏈仍不會彼此分離，這因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。只要用堿處理的強度和時間不要太過，當pH值恢復到中性時，DNA雙鏈就會再次形成。
在裂解過程中，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體DNA會相互纏繞成大型復合物，后者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當用K+取代Na+時，復合物會從溶液中有效地沉淀下來，離心除去變性劑后，就可以從上清中回收復性的質粒DNA。
在SDS存在的條件下，堿水解是一項非常靈活的技術，它對E. coli的所有菌株都適用，并且其細菌培養(yǎng)物的體積可以從1-500mL以上。
推薦
