PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用
PCR 技術(shù)檢測(cè)微生物的基本原理是在被檢測(cè)微生物核酸序列, 在PCR 體系下經(jīng)高溫變性、低溫退火、適溫延伸三步循環(huán)將單個(gè)核酸分子序列以2的指數(shù)進(jìn)行大量復(fù)制擴(kuò)增的過程。即在檢測(cè)時(shí), 被檢測(cè)微生物雙鏈DNA 序列在94℃變性解鏈成雙鏈, 55℃特異性引物與單鏈DNA 結(jié)合, 72℃在引物的引導(dǎo)延伸復(fù)制檢測(cè)微生物DNA 序列。以上三步進(jìn)行循環(huán)擴(kuò)增得到大量的被檢測(cè)微生物DNA 序列, 最后一般在凝膠電泳下檢測(cè)目的DNA。理論上只要樣品中有一個(gè)分子的微生物就可以在短時(shí)間內(nèi)用PCR 技術(shù)檢測(cè)到。食品中污染微生物種類很多, 即使是同一種食品中微生物種類也有很多, 用傳統(tǒng)的方法檢測(cè)食品中微生物要分離出所有的微生物很困難。特別是在檢測(cè)食品中的弱勢(shì)菌時(shí), 可能很難用傳統(tǒng)的方法檢測(cè)出來, 特別是有些微生物很難培養(yǎng), 而用PCR 技術(shù)檢測(cè)這些微生物可以避免這些問題, 因此, 利用PCR 技術(shù)能夠比較準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中微生物。
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