新冠總抗體+核酸檢測(cè)=有效的早期新冠發(fā)現(xiàn)方案
新型冠狀病毒感染的肺炎疫情在國(guó)內(nèi)已經(jīng)得到了較好的防控，抗疫工作進(jìn)入“外防輸入，內(nèi)防反彈”的關(guān)鍵階段。4月22日，中共中央政治局常委、國(guó)務(wù)院總理、中央應(yīng)對(duì)新冠肺炎疫情工作領(lǐng)導(dǎo)小組組長(zhǎng)李克強(qiáng)主持召開(kāi)領(lǐng)導(dǎo)小組會(huì)議。會(huì)議指出，做好常態(tài)化防控要加快提升檢測(cè)能力，大規(guī)模開(kāi)展核酸和抗體檢測(cè)?，F(xiàn)階段無(wú)癥狀感染者對(duì)疫情防控帶來(lái)了巨大的挑戰(zhàn)，所以在這種背景下核酸和抗體檢測(cè)更為的必要和緊迫。
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核酸+抗體，可以彌補(bǔ)核酸檢測(cè)陰性易造成的漏診
新冠核酸檢測(cè)具有早期診斷、靈敏度和特異性高等特點(diǎn)，是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但是受取樣、提取效率及檢測(cè)條件要求較高的影響，需要快速便捷的檢測(cè)方法作為核酸檢測(cè)的補(bǔ)充。
新型冠狀病毒血清抗體檢測(cè)是在病毒侵入人體后，首先出現(xiàn)的是免疫球蛋白IgM抗體，該抗體大約需要5-7天產(chǎn)生，然后在10-15天出現(xiàn)IgG抗體。因此，IgM抗體增高提示近期急性感染，IgG抗體增高提示既往感染。新冠總抗體包含IgM、IgG、IgA等抗體。
血清學(xué)檢測(cè)最大的優(yōu)勢(shì)在于方便快捷，檢測(cè)時(shí)間較短，能夠有效突破現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)對(duì)人員、場(chǎng)所的限制，縮短檢測(cè)用時(shí)。因此核酸+抗體協(xié)同作用，可以彌補(bǔ)核酸檢測(cè)陰性容易造成漏診的缺點(diǎn)。目前新冠抗體檢測(cè)試劑主要有總抗體檢測(cè)試劑、IgM抗體和IgG抗體檢測(cè)試劑。
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新冠抗體檢測(cè)的方法
根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件，免疫學(xué)檢測(cè)抗體的模式主要分為：捕獲法、間接法、雙抗原夾心法等。雙抗原夾心法，不受類風(fēng)濕因子等因素的干擾，基于病毒兩側(cè)同時(shí)進(jìn)行特異性的抗原抗體結(jié)合，從反應(yīng)機(jī)制上有效的較少假陽(yáng)性，特異性較捕獲法、間接法都高，同時(shí)可以檢測(cè)樣本中各類型抗體（包含IgM和IgG）[1]。近年來(lái)，包含乙肝抗體、梅毒抗體[2]、艾滋病毒抗體[3]、丙肝抗體[4]等領(lǐng)域都已經(jīng)成功的運(yùn)用，艾滋病抗體檢測(cè)更是實(shí)現(xiàn)了從間接法到雙抗原夾心法的第四代檢測(cè)。
通過(guò)雙抗原夾心檢測(cè)總抗體，既包含了IgM抗體檢測(cè)早期診斷新型冠狀病毒的優(yōu)勢(shì)，又有檢測(cè)IgG抗體既往感染（包含處于恢復(fù)期IgM下降的患者）的特點(diǎn)，可以更好的防止漏檢，縮短診斷窗口期，具有更高的特異性和靈敏度，同時(shí)節(jié)省操作時(shí)間和成本、方便快捷，減少交叉污染等優(yōu)勢(shì)，在新型冠狀病毒檢測(cè)中具有重要的價(jià)值！據(jù)報(bào)道，目前國(guó)際診斷行業(yè)巨頭羅氏、西門子、伯樂(lè)、強(qiáng)生奧森多等紛紛研制總抗體檢測(cè)試劑。
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研究證實(shí)：新冠總抗體診斷新冠肺炎優(yōu)于IgM+IgG抗體聯(lián)合診斷
近期，多篇國(guó)內(nèi)研究發(fā)布了在新冠病毒感染疾病進(jìn)程中新冠總抗體（Ab）、IgM抗體和IgG抗體與疾病感染時(shí)間關(guān)系的研究。新冠總抗體的檢測(cè)采用雙抗原夾心法，IgM抗體和IgG檢測(cè)采用捕獲法。3種檢測(cè)方法中，總抗體檢測(cè)均顯示出比IgM更高的敏感性和特異性。與總抗體相比，單獨(dú)IgM抗體、IgG抗體、IgM抗體+IgG抗體診斷新冠肺炎的敏感性均低于總抗體。特異性驗(yàn)證表明新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的特異性分別為99.1%、98.6%和99.0%[5]。
新冠抗體與疾病感染時(shí)間關(guān)系的研究顯示，在新冠肺炎發(fā)病后1-7天，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的敏感性分別為38.3%、28.7%和19.1%；發(fā)病后8-14天，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的敏感性快速升高，分別為89.6%、73.3%和54.1%；發(fā)病后15-39天，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的敏感性分別達(dá)到100%、94.3%和79.8%[6]。
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新冠總抗體+核酸可將診斷早期新冠（1-7天）的敏感性提高12%
在新冠肺炎患者發(fā)病后1-7天內(nèi)、8-14天及15-39天，核酸（RNA）檢測(cè)的敏感性分別是66.7%，54%和44.5%。新冠肺炎患者發(fā)病后1-7天內(nèi)、8-14天及15-39天，總抗體+RNA聯(lián)合診斷的敏感性可以提高到78.7%、97%和100%。在新冠肺炎發(fā)病早期（1-7天），總抗體檢測(cè)聯(lián)合核酸檢測(cè)可以將單一核酸檢測(cè)診斷新冠的敏感性提高12%[6]。
針對(duì)核酸為陰性的新冠肺炎患者，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體分別在新冠肺炎患者發(fā)病后不同時(shí)間均有一定的檢出率。核酸陰性的新冠肺炎患者發(fā)病后1-3天，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的檢出率均為28.6%；發(fā)病后4-7天，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的檢出率分別為53.6%、42.9%和28.6%；發(fā)病后8-14天，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的檢出率分別為98.2%、78.9%和70.2%；發(fā)病后15-39天，新冠總抗體、IgM抗體和IgG抗體的檢出率分別為100%、93.3%和73.3%[6]。
基于雙抗原夾心法在機(jī)制上的優(yōu)勢(shì)，總抗體檢測(cè)能比單獨(dú)檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體提前1-3天診斷出新冠感染，并且陽(yáng)性結(jié)果更為明顯，可以作為更好的早期診斷新冠肺炎的血清學(xué)診斷指標(biāo)。在新冠感染的前1-7天，與IgM/IgG相比，總抗體檢測(cè)+核酸檢測(cè)能更有效提高新冠的檢出率，是更有效的篩查策略。
總之，基于雙抗原夾心法的新冠總抗體檢測(cè)應(yīng)該作為不同應(yīng)用場(chǎng)景下核酸RNA檢測(cè)的有效補(bǔ)充，可以提高新冠肺炎診斷的敏感型和特異性。同時(shí)，相對(duì)于IgM/IgG分別檢測(cè)，總抗體檢測(cè)可以節(jié)約醫(yī)療費(fèi)用。建議總抗體檢測(cè)的應(yīng)用場(chǎng)景應(yīng)包括：臨床患者和密切接觸者的篩查和管理、重點(diǎn)高危地區(qū)人群的篩查、流行病學(xué)的調(diào)查。
參考文獻(xiàn)：
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2. 孫強(qiáng), 李艷琴, 何寶明: 雙抗原夾心法和間接法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體對(duì)比研究. 陜西醫(yī)學(xué)雜志 2019, 48:1231-1234.
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4. He J, Xiu B, Wang G, Chen K, Feng X, Song X, Zhu C, Yang X, Bai G, Ling S, Zhang H: Construction, expression, purification and biotin labeling of a single recombinant multi-epitope antigen for double-antigen sandwich ELISA to detect hepatitis C virus antibody. Protein Pept Lett 2011, 18:839-847.
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