PEG促進細胞融合的注意事項有那些
(1)事先做好兩種原生質(zhì)體融合的識別標記,如色素、缺陷型、抗性標記等。
(2)原生質(zhì)體或細胞密度應(yīng)在105個/ml,兩種原生質(zhì)體或細胞按1:1等量混合
(3)PEG誘導融合的效果,同分子量大小及濃度高低密切相關(guān)。分子量和濃度愈大,促進細胞融合的能力愈高,而其粘度及對細胞的毒性也隨之增大,故通常以選用分子4000-6000濃度30-50%的PEG進行融合為宜。
(4)PEG使細胞融合或致死劑量界限很狹小,為達到成功有效的融合,還必須嚴格掌握PEG的處理時間。一般加入PEG后,24℃培育10-20min(注意時間宜短不宜長,過長使原生質(zhì)體周圍包裹一層膜形成凝集體,降低融合率),緩緩加入高鈣離子溶液15min后用沖洗液清洗,離心收集細胞或原生質(zhì)體。
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