慢病毒的濃縮與純化——PEG-8000濃縮法
實驗概要
本實驗介紹了用PEG-8000濃縮法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。
主要試劑
1. NaCl
2. PEG8000
主要設(shè)備
1. 高壓滅菌鍋
2. 0.45μm濾頭
3. 高速離心機(jī)
4. 低溫冰箱
實驗步驟
1. 5X PEG8000 NaCl配制稱取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q純水中；121攝氏度 30min 濕熱滅絕 30min；保存在4℃。
2. 使用0.45μm濾頭過濾慢病毒上清液；
3. 每30ml過濾后的病毒初始液，加入5X PEG-8000 NaCl母液7.5 ml；
4. 每20～30min混合一次，共進(jìn)行3-5次；
5. 4度放置過夜；
6. 4度，4000 g，離心 20min；
7. 吸棄上清，靜置管子1～2分鐘，吸走殘余液體；
8. 加入適量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；
9. 集中后的病毒懸液分裝成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲存在-80 ℃。
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