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提取的總RNA跑膠為什么只有3條帶

2023.2.16

三條是主帶

哺乳動(dòng)物的RNA包括mRNA,rRNA,tRNA和小RNA,根據(jù)分子量和沉降系數(shù)的不同,rRNA又可分為28s, 18s 和5s 的rRNA。從RNA的含量上看,rRNA是幾種RNA中最多的,高達(dá)90%以上,而mRNA很少,只有1-2%,而其他兩種RNA的分子量比較小,這就解釋了為什么從凝膠電泳的結(jié)果上只能看到三條帶。而這三條帶的完整性,就代表了mRNA的完整性,也就是說如果我們觀察到這三條帶是清新完整,就說明我們提取到的RNA質(zhì)量比較好,反之,如果觀察到這三條帶成彌散狀,就說明我們提取到的RNA比較不好。

核糖體RNA(ribosomal RNA,rRNA)是組成核糖體的主要成分。核糖體是合成蛋白質(zhì)的工廠。在大腸桿菌中,rRNA量占細(xì)胞總RNA量的75%-85%,而tRNA占15%,mRNA僅占3-5%。

rRNA一般與核糖體蛋白質(zhì)結(jié)合在一起,形成核糖體(ribosome),如果把rRNA從核糖體上除掉,核糖體的結(jié)構(gòu)就會(huì)發(fā)生塌陷。

原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。S為沉降系數(shù)(sedimentation coefficient),當(dāng)用超速離心測定一個(gè)粒子的沉淀速度時(shí),此速度與粒子的大小直徑成比例。5S含有120個(gè)核苷酸,16S含有1540個(gè)核苷酸,而23S含有2900個(gè)核苷酸。而真核生物有4種rRNA,它們分子大小分別是5S、5.8S、18S和28S,分別具有大約120、160、 1900和4700個(gè)核苷酸。

RNA樣品電泳后,可見28S、18S及5S小分子RNA條帶,則說明完整性好。若有降解可能是操作不當(dāng)或污染了RNase.。28S和18S RNA比值約為2:1,表明RNA無降解。如比值逆轉(zhuǎn),則表明RNA降解。

應(yīng)該從下到上:5s、18s、28s、

120、1900、4700bp、

提取的總RNA跑膠從大到小有帶3條,

5S,18S,28S。 5S應(yīng)該最暗,28S應(yīng)該最亮。和DNA Marker比較的話,28S大概在5K左右,18S大概在3K左右,5.8S和5S是用瓊脂糖是分開不了的,只是一條很弱的條帶,在100BP左右,好的RNA要求28S亮度是18S的兩倍。

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