哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程 & 培養(yǎng)條件
哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程
哺乳動(dòng)物細(xì)胞在培養(yǎng)過程中會(huì)經(jīng)過組織提取，原代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)等過程。傳代培養(yǎng)會(huì)根據(jù)具體情況分為細(xì)胞株培養(yǎng)和細(xì)胞系培養(yǎng)。如下對各個(gè)過程進(jìn)行簡述：
原代培養(yǎng)：從動(dòng)物機(jī)體取出組織后切碎，經(jīng)過各種酶（常用胰蛋白酶），螯合劑（常用EDTA）結(jié)合機(jī)械方法（吸液管反復(fù)吸吹）處理，分散成單細(xì)胞，置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。一般把從動(dòng)物有機(jī)體內(nèi)取出細(xì)胞開始培養(yǎng)，到繁殖十代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
經(jīng)過原代細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞分裂繁殖，培養(yǎng)物逐漸增多長滿培養(yǎng)空間，繼而相互之間接觸，發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，生長速度逐漸減慢甚至停止。需要重新接種到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)進(jìn)行傳（繼）代培養(yǎng)。
傳（繼）代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳（繼）代培養(yǎng)。
細(xì)胞系：初代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，即稱之為細(xì)胞系。如果細(xì)胞系的生存期有限，則稱為有限細(xì)胞系。已獲得無限繁殖能力，能持續(xù)生存的細(xì)胞系稱為連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系。
細(xì)胞株：從一個(gè)經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系，用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增值形成的細(xì)胞群，稱為細(xì)胞株。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原珠形狀不同的細(xì)胞群，成為亞株。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件
不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞在各個(gè)階段的培養(yǎng)，都需要有基礎(chǔ)的培養(yǎng)條件，歸納如下：
1、無菌無毒的環(huán)境：對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無菌處理；培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過程中污染；定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。
2、營養(yǎng)：液體合成培養(yǎng)基包含糖、氨基酸、促生長因子、水、無機(jī)鹽、微量元素等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。
3、適宜的溫度和pH：人和哺乳動(dòng)物細(xì)胞最適宜溫度大多為36±0.5℃。適宜的酸堿度為pH 7.2-7.4。
4、氣體環(huán)境：氣體環(huán)境一般為“95% 空氣+5% CO2”混合氣體。氧氣是細(xì)胞代謝必須氣體，CO2維持培養(yǎng)液pH。
